RACE——cDNA末端快速克隆技術(shù)5

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從分子水平上獲得特定DNA片段,包括目的基因分離,全長(zhǎng)cDNA片段釣取,染色體步移,點(diǎn)突變,甲基化檢測(cè),SNP檢測(cè),線粒體分析等。通過(guò)技術(shù)手段,獲得可用于研究的目的基因序列,同時(shí)通過(guò)對(duì)基因序列基本形狀的分析,獲得更多的遺傳信息,如CDS編碼及翻譯情況,UTR區(qū)對(duì)表達(dá)的調(diào)控及轉(zhuǎn)錄后修飾,啟動(dòng)子區(qū)重要的motif序列及TSS位點(diǎn),甲基化位點(diǎn),SNP情況,基因的同源性,物種的進(jìn)化地位等信息。是后續(xù)基因功能研究的基礎(chǔ)。

您需要提供以下材料:

實(shí)驗(yàn)樣品:

提取Total RNA的材料:動(dòng)植物組織,細(xì)胞或菌液(保證材料充足);

或者由您直接提供總RNA: 3’RACE:Total RNA>15μg; 5’RACE:Total RNA>25μg。

序列信息:

大于200bp的已知序列(請(qǐng)注明已知序列的5’端及3’端):如果已知序列比較短,建議先進(jìn)行3’RACE再進(jìn)行5’RACE,以提高實(shí)驗(yàn)的成功率;

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和參考文獻(xiàn):這將會(huì)幫助我們更好地理解您的實(shí)驗(yàn)背景,有利于實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。

您將獲得以下結(jié)果:

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:引物信息 實(shí)驗(yàn)過(guò)程 PCR產(chǎn)物照片;

測(cè)序結(jié)果:測(cè)序彩色波形圖、測(cè)序方向圖、堿基序列圖;

實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物:引物、測(cè)序用質(zhì)粒(限產(chǎn)生克隆測(cè)序的情況)。

注:

1. 請(qǐng)保證材料或者總RNA新鮮,如果基因的含量較低或者未知序列較長(zhǎng),樣品量需相應(yīng)增加;

2. 我們會(huì)根據(jù)已知序列進(jìn)行特異性擴(kuò)增,如果得不到目的序列或?yàn)榉悄康幕虻男蛄?,我們將停止?shí)驗(yàn)并收取實(shí)驗(yàn)成本費(fèi)用;如果得到序列與您提供的序列有個(gè)別堿基不符,我們?cè)谡髑竽囊庖?jiàn)后決定是否進(jìn)行RACE實(shí)驗(yàn);

3. 我們將設(shè)計(jì)跨內(nèi)含子引物PCR檢驗(yàn)基因表達(dá)水平,如果經(jīng)驗(yàn)證,樣品中基因表達(dá)含量低時(shí),我們將與您溝通后,決定下一步實(shí)驗(yàn)使用的方法;

4. 對(duì)于原核生物RNA 我們僅進(jìn)行5' RACE。

結(jié)果展示:

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