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基本信息

注意：

客戶在我公司選擇構(gòu)建載體服務(wù)項(xiàng)目時(shí)，請(qǐng)自行提供母源載體。

如要使用本公司保存的母源載體時(shí)，本公司不能保證所有母源載體完全符合客戶預(yù)期，也不承擔(dān)由此產(chǎn)生的任何責(zé)任。

載體描述

原核表達(dá)載體(pCold-SUMO)是在 pCold 載體基礎(chǔ)上改造而成，該載體啟動(dòng)子(cspA Promoter)來(lái)源于南極嗜冷細(xì)菌，在低溫下(15 度)才能啟動(dòng)蛋白的表達(dá)。低溫下細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢，使得蛋白合成速度減慢，從而最大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率，提高了蛋白可溶性表達(dá)，增強(qiáng)了活性蛋白的表達(dá)比率。該表達(dá)系統(tǒng)所包含的 SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的表達(dá)量，而且進(jìn)一步提高了蛋白的可溶表達(dá)幾率。同時(shí)，TEE信號(hào)肽可增強(qiáng)冷啟動(dòng)子調(diào)控下目的蛋白的高表達(dá)。

BL21(DE3)Chaprone E.coli 細(xì)菌中含有分子伴侶蛋白質(zhì)粒，其表達(dá)產(chǎn)物可協(xié)助重組蛋白正確折疊形成可溶活性蛋白。分子伴侶蛋白質(zhì)粒為氯霉素抗性（chloramphenicol，Cmr）的表達(dá)受控于四環(huán)素（tetR）操縱子。

pCold-SUMO質(zhì)粒是利用冷休克基因CSPA啟動(dòng)子設(shè)計(jì)高效率蛋白質(zhì)表達(dá)載體。在E.COLI啟動(dòng)子下游處，插入了lac操縱子，以便嚴(yán)格控制表達(dá)。此外，5’非翻譯區(qū)（5’UTR），翻譯增強(qiáng)元件（TEE）,His標(biāo)簽序列，Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)（MCS）位于CAPS啟動(dòng)子的下游。當(dāng)培養(yǎng)溫度切換到低溫時(shí)，大腸桿菌暫時(shí)停止生長(zhǎng)，大部分的大腸桿菌蛋白質(zhì)表達(dá)減少，但是一類稱為冷休克蛋白的蛋白質(zhì)被特異性誘導(dǎo)表達(dá)。

載體序列

ORIGIN

        1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa

       61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat

      121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt

      181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt

      241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcatat cgaaggtagg

      301 cataatatgt cggactcaga agtcaatcaa gaagctaagc cagaggtcaa gccagaagtc

      361 aagcctgaga ctcacatcaa tttaaaggtg tccgatggat cttcagagat cttcttcaag

      421 atcaaaaaga ccactccttt aagaaggctg atggaagcgt tcgctaaaag acagggtaag

      481 gaaatggact ccttaagatt cttgtacgac ggtattagaa tccaagctga tcagacccct

      541 gaagatttgg acatggagga taacgatatt attgaggctc acagagaaca gattggtcat

      601 atggagctcg gtaccctcga gggatccgaa ttcaagcttg tcgacctgca gtctagatag

      661 gtaatctctg cttaaaagca cagaatctaa gatccctgcc atttggcggg gattttttta

      721 tttgttttca ggaaataaat aatcgatcgc gtaataaaat ctattattat ttttgtgaag

      781 aataaatttg ggtgcaatga gaatgcgcag gccctttcgt ctcgcgcgtt tcggtgatga

      841 cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga

      901 tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggctg

      961 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccataaaa ttgtaaacgt

     1021 taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata

     1081 ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag cccgagatag ggttgagtgt

     1141 tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg

     1201 aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcacccaaat caagtttttt

     1261 ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc

     1321 ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg

     1381 cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct

     1441 taatgcgccg ctacagggcg cgtactatgg ttgctttgac gtatgcggtg tgaaataccg

     1501 cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgtcagg tggcactttt cggggaaatg

     1561 tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga

     1621 gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac

     1681 atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc

     1741 cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca

     1801 tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc

     1861 caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg

     1921 ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac

     1981 cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca

     2041 taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg

     2101 agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac

     2161 cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg

     2221 caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat

     2281 taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg

     2341 ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg

     2401 cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc

     2461 aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc

     2521 attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt

     2581 tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt

     2641 aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt

     2701 gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag

     2761 cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca

     2821 gcagagcgca gataccaaat actgttcttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca

     2881 agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg

     2941 ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg

     3001 cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct

     3061 acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga

     3121 gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc

     3181 ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg

     3241 agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg

     3301 cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatagtc atgccccgcg

     3361 cccaccggaa ggagctgact gggttgaagg ctctcaaggg catcggtcga gatcccggtg

     3421 cctaatgagt gagctaactt acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg

     3481 gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc

     3541 gtattgggcg ccagggtggt ttttcttttc accagtgaga cgggcaacag ctgattgccc

     3601 ttcaccgcct ggccctgaga gagttgcagc aagcggtcca cgctggtttg ccccagcagg

     3661 cgaaaatcct gtttgatggt ggttaacggc gggatataac atgagctgtc ttcggtatcg

     3721 tcgtatccca ctaccgagat atccgcacca acgcgcagcc cggactcggt aatggcgcgc

     3781 attgcgccca gcgccatctg atcgttggca accagcatcg cagtgggaac gatgccctca

     3841 ttcagcattt gcatggtttg ttgaaaaccg gacatggcac tccagtcgcc ttcccgttcc

     3901 gctatcggct gaatttgatt gcgagtgaga tatttatgcc agccagccag acgcagacgc

     3961 gccgagacag aacttaatgg gcccgctaac agcgcgattt gctggtgacc caatgcgacc

     4021 agatgctcca cgcccagtcg cgtaccgtct tcatgggaga aaataatact gttgatgggt

     4081 gtctggtcag agacatcaag aaataacgcc ggaacattag tgcaggcagc ttccacagca

     4141 atggcatcct ggtcatccag cggatagtta atgatcagcc cactgacgcg ttgcgcgaga

     4201 agattgtgca ccgccgcttt acaggcttcg acgccgcttc gttctaccat cgacaccacc

     4261 acgctggcac ccagttgatc ggcgcgagat ttaatcgccg cgacaatttg cgacggcgcg

     4321 tgcagggcca gactggaggt ggcaacgcca atcagcaacg actgtttgcc cgccagttgt

     4381 tgtgccacgc ggttgggaat gtaattcagc tccgccatcg ccgcttccac tttttcccgc

     4441 gttttcgcag aaacgtggct ggcctggttc accacgcggg aaacggtctg ataagagaca

     4501 ccggcatact ctgcgacatc gtataacgtt actggtttca cattcaccac cctgaattga

     4561 ctctcttccg ggcgctatca tgccataccg cgaaaggttt tgcgccattc gatggtgtcc

     4621 gggatctcga cgctctccct tatgcgactc ctgcattagg aagcagccca gtagtaggtt

     4681 gaggccgttg agcaccgccg ccgc

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