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基本信息
載體類型: | 大腸桿菌蛋白表達(dá)載體 |
載體抗性: | Amp |
載體標(biāo)簽: | N-SUMO |
篩選標(biāo)記: | / |
啟動(dòng)子: | cspA |
表達(dá)水平: | 低拷貝 |
載體大小: | 4704bp |
克隆方法: | 多克隆位點(diǎn),限制性內(nèi)切酶 |
5' 測(cè)序引物: | / |
3' 測(cè)序引物: | / |
備注: | 如有侵權(quán)請(qǐng)產(chǎn)權(quán)持有人盡快聯(lián)系法務(wù)15927229196 |
注意:
客戶在我公司選擇構(gòu)建載體服務(wù)項(xiàng)目時(shí),請(qǐng)自行提供母源載體。
如要使用本公司保存的母源載體時(shí),本公司不能保證所有母源載體完全符合客戶預(yù)期,也不承擔(dān)由此產(chǎn)生的任何責(zé)任。
載體描述
原核表達(dá)載體(pCold-SUMO)是在 pCold 載體基礎(chǔ)上改造而成,該載體啟動(dòng)子(cspA Promoter)來(lái)源于南極嗜冷細(xì)菌,在低溫下(15 度)才能啟動(dòng)蛋白的表達(dá)。低溫下細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢,使得蛋白合成速度減慢,從而最大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率,提高了蛋白可溶性表達(dá),增強(qiáng)了活性蛋白的表達(dá)比率。該表達(dá)系統(tǒng)所包含的 SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的表達(dá)量,而且進(jìn)一步提高了蛋白的可溶表達(dá)幾率。同時(shí),TEE信號(hào)肽可增強(qiáng)冷啟動(dòng)子調(diào)控下目的蛋白的高表達(dá)。
BL21(DE3)Chaprone E.coli 細(xì)菌中含有分子伴侶蛋白質(zhì)粒,其表達(dá)產(chǎn)物可協(xié)助重組蛋白正確折疊形成可溶活性蛋白。分子伴侶蛋白質(zhì)粒為氯霉素抗性(chloramphenicol,Cmr)的表達(dá)受控于四環(huán)素(tetR)操縱子。
pCold-SUMO質(zhì)粒是利用冷休克基因CSPA啟動(dòng)子設(shè)計(jì)高效率蛋白質(zhì)表達(dá)載體。在E.COLI啟動(dòng)子下游處,插入了lac操縱子,以便嚴(yán)格控制表達(dá)。此外,5’非翻譯區(qū)(5’UTR),翻譯增強(qiáng)元件(TEE),His標(biāo)簽序列,Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)(MCS)位于CAPS啟動(dòng)子的下游。當(dāng)培養(yǎng)溫度切換到低溫時(shí),大腸桿菌暫時(shí)停止生長(zhǎng),大部分的大腸桿菌蛋白質(zhì)表達(dá)減少,但是一類稱為冷休克蛋白的蛋白質(zhì)被特異性誘導(dǎo)表達(dá)。
載體序列
ORIGIN
1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcatat cgaaggtagg
301 cataatatgt cggactcaga agtcaatcaa gaagctaagc cagaggtcaa gccagaagtc
361 aagcctgaga ctcacatcaa tttaaaggtg tccgatggat cttcagagat cttcttcaag
421 atcaaaaaga ccactccttt aagaaggctg atggaagcgt tcgctaaaag acagggtaag
481 gaaatggact ccttaagatt cttgtacgac ggtattagaa tccaagctga tcagacccct
541 gaagatttgg acatggagga taacgatatt attgaggctc acagagaaca gattggtcat
601 atggagctcg gtaccctcga gggatccgaa ttcaagcttg tcgacctgca gtctagatag
661 gtaatctctg cttaaaagca cagaatctaa gatccctgcc atttggcggg gattttttta
721 tttgttttca ggaaataaat aatcgatcgc gtaataaaat ctattattat ttttgtgaag
781 aataaatttg ggtgcaatga gaatgcgcag gccctttcgt ctcgcgcgtt tcggtgatga
841 cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga
901 tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggctg
961 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccataaaa ttgtaaacgt
1021 taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata
1081 ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag cccgagatag ggttgagtgt
1141 tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg
1201 aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact acgtgaacca tcacccaaat caagtttttt
1261 ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc
1321 ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg
1381 cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct
1441 taatgcgccg ctacagggcg cgtactatgg ttgctttgac gtatgcggtg tgaaataccg
1501 cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgtcagg tggcactttt cggggaaatg
1561 tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga
1621 gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac
1681 atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc
1741 cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca
1801 tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc
1861 caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg
1921 ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac
1981 cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca
2041 taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg
2101 agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac
2161 cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg
2221 caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat
2281 taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg
2341 ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg
2401 cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc
2461 aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc
2521 attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt
2581 tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt
2641 aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt
2701 gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag
2761 cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca
2821 gcagagcgca gataccaaat actgttcttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca
2881 agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg
2941 ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg
3001 cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct
3061 acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga
3121 gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc
3181 ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg
3241 agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg
3301 cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatagtc atgccccgcg
3361 cccaccggaa ggagctgact gggttgaagg ctctcaaggg catcggtcga gatcccggtg
3421 cctaatgagt gagctaactt acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg
3481 gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc
3541 gtattgggcg ccagggtggt ttttcttttc accagtgaga cgggcaacag ctgattgccc
3601 ttcaccgcct ggccctgaga gagttgcagc aagcggtcca cgctggtttg ccccagcagg
3661 cgaaaatcct gtttgatggt ggttaacggc gggatataac atgagctgtc ttcggtatcg
3721 tcgtatccca ctaccgagat atccgcacca acgcgcagcc cggactcggt aatggcgcgc
3781 attgcgccca gcgccatctg atcgttggca accagcatcg cagtgggaac gatgccctca
3841 ttcagcattt gcatggtttg ttgaaaaccg gacatggcac tccagtcgcc ttcccgttcc
3901 gctatcggct gaatttgatt gcgagtgaga tatttatgcc agccagccag acgcagacgc
3961 gccgagacag aacttaatgg gcccgctaac agcgcgattt gctggtgacc caatgcgacc
4021 agatgctcca cgcccagtcg cgtaccgtct tcatgggaga aaataatact gttgatgggt
4081 gtctggtcag agacatcaag aaataacgcc ggaacattag tgcaggcagc ttccacagca
4141 atggcatcct ggtcatccag cggatagtta atgatcagcc cactgacgcg ttgcgcgaga
4201 agattgtgca ccgccgcttt acaggcttcg acgccgcttc gttctaccat cgacaccacc
4261 acgctggcac ccagttgatc ggcgcgagat ttaatcgccg cgacaatttg cgacggcgcg
4321 tgcagggcca gactggaggt ggcaacgcca atcagcaacg actgtttgcc cgccagttgt
4381 tgtgccacgc ggttgggaat gtaattcagc tccgccatcg ccgcttccac tttttcccgc
4441 gttttcgcag aaacgtggct ggcctggttc accacgcggg aaacggtctg ataagagaca
4501 ccggcatact ctgcgacatc gtataacgtt actggtttca cattcaccac cctgaattga
4561 ctctcttccg ggcgctatca tgccataccg cgaaaggttt tgcgccattc gatggtgtcc
4621 gggatctcga cgctctccct tatgcgactc ctgcattagg aagcagccca gtagtaggtt
4681 gaggccgttg agcaccgccg ccgc
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