1. 產(chǎn)品說明
S17-1菌株的染色體中整合了RP4-2質(zhì)粒,該質(zhì)??梢詳y帶染色體的部分DNA在接合菌株之間轉(zhuǎn)移。 S17- 1菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA1),提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;同時(shí)為重組酶缺陷型 (recA1),減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩(wěn)定性。Tn7賦予該菌株弱的鏈霉素抗性。S17-1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>1×108 cfu/μg DNA。
2. 基因型
RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1, thiE1, hsdR17, creC510
3. 儲(chǔ)存及使用環(huán)境
本產(chǎn)品應(yīng)保存在-80℃,不可反復(fù)凍融或放置時(shí)間過長,否則會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
進(jìn)行轉(zhuǎn)化過程中,請(qǐng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
4.操作方法
1. S17-1感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)(12-15 h)。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長,長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。