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基本信息

質(zhì)粒圖譜和多克隆位點(diǎn)信息

注意：

客戶(hù)在我公司選擇構(gòu)建載體服務(wù)項(xiàng)目時(shí)，請(qǐng)自行提供母源載體。

如要使用本公司保存的母源載體時(shí)，本公司不能保證所有母源載體完全符合客戶(hù)預(yù)期，也不承擔(dān)由此產(chǎn)生的任何責(zé)任。

載體描述

闡明蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能是后基因組研究的一個(gè)重要課題。高效率的蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)是研究這些課題的不可缺少的基本技術(shù)。大腸桿菌作為宿主的表達(dá)系統(tǒng)中被廣泛使用于生產(chǎn)重組蛋白。大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有良好的優(yōu)勢(shì),方法簡(jiǎn)單，成本低。然而，對(duì)于某些基因，蛋白表達(dá)很困難，表達(dá)的蛋白質(zhì)不溶。

為了解決這些問(wèn)題，TAKARA與Masayori Inouye教授（美國(guó)新澤西醫(yī)學(xué)和牙科大學(xué)）進(jìn)行聯(lián)合研究，以制定一個(gè)高效基于低溫冷休克蛋白基因的大腸桿菌表達(dá)載體。pCold DNA系列產(chǎn)品具有上述的優(yōu)點(diǎn)，并提供了一個(gè)重要功能和結(jié)構(gòu)的分析以及其他蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域的工具。

<產(chǎn)品概況和特點(diǎn)>

當(dāng)培養(yǎng)的大腸桿菌的溫度充分降低，幾乎暫時(shí)停止生長(zhǎng)大部分的蛋白表達(dá)減少，而此時(shí)一組蛋白質(zhì)稱(chēng)為“冷休克蛋白”被專(zhuān)門(mén)誘導(dǎo)表達(dá)。

冷休克表達(dá)載體，pCold I-IV, 是利用冷休克基因cspA啟動(dòng)子設(shè)計(jì)高效率蛋白質(zhì)表達(dá)載體。cspA的啟動(dòng)子的下游處，插入了lac操縱子，以便嚴(yán)格控制表達(dá)。此外，5'非翻譯區(qū)（5'UTR），翻譯增強(qiáng)元件（TEE），His標(biāo)簽序列，Xa因子切割位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn)（MCS）位于在cspA啟動(dòng)子的下游的。由于該產(chǎn)品采用了大腸桿菌的啟動(dòng)子，大多數(shù)大腸桿菌菌株可被用作表達(dá)宿主。有四種類(lèi)型的pCold載體，他們的原件的位置稍有不同，TEE，His標(biāo)簽序列和Factor Xa酶切位點(diǎn)。

載體序列

ORIGIN

        1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa

       61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat

      121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt

      181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt

      241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcatat cgaaggtagg

      301 catatggagc tcggtaccct cgagggatcc gaattcaagc ttgtcgacct gcagtctaga

      361 taggtaatct ctgcttaaaa gcacagaatc taagatccct gccatttggc ggggattttt

      421 ttatttgttt tcaggaaata aataatcgat cgcgtaataa aatctattat tatttttgtg

      481 aagaataaat ttgggtgcaa tgagaatgcg caggcccttt cgtctcgcgc gtttcggtga

      541 tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc

      601 ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg

      661 ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga gtgcaccata aaattgtaaa

      721 cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca

      781 ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagcccgaga tagggttgag

      841 tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg

      901 gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccca aatcaagttt

      961 tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag

     1021 agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc

     1081 gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc

     1141 gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtacta tggttgcttt gacgtatgcg gtgtgaaata

     1201 ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgtc aggtggcact tttcggggaa

     1261 atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca

     1321 tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc

     1381 aacatttccg tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc

     1441 acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt

     1501 acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt

     1561 ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg

     1621 ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact

     1681 caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg

     1741 ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga

     1801 aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg

     1861 aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa

     1921 tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac

     1981 aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc

     2041 cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca

     2101 ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga

     2161 gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta

     2221 agcattggta actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc

     2281 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc

     2341 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt

     2401 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac

     2461 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct

     2521 tcagcagagc gcagatacca aatactgttc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact

     2581 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg

     2641 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata

     2701 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga

     2761 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag

     2821 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg

     2881 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac

     2941 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca

     3001 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacata gtcatgcccc

     3061 gcgcccaccg gaaggagctg actgggttga aggctctcaa gggcatcggt cgagatcccg

     3121 gtgcctaatg agtgagctaa cttacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt

     3181 cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt

     3241 tgcgtattgg gcgccagggt ggtttttctt ttcaccagtg agacgggcaa cagctgattg

     3301 cccttcaccg cctggccctg agagagttgc agcaagcggt ccacgctggt ttgccccagc

     3361 aggcgaaaat cctgtttgat ggtggttaac ggcgggatat aacatgagct gtcttcggta

     3421 tcgtcgtatc ccactaccga gatatccgca ccaacgcgca gcccggactc ggtaatggcg

     3481 cgcattgcgc ccagcgccat ctgatcgttg gcaaccagca tcgcagtggg aacgatgccc

     3541 tcattcagca tttgcatggt ttgttgaaaa ccggacatgg cactccagtc gccttcccgt

     3601 tccgctatcg gctgaatttg attgcgagtg agatatttat gccagccagc cagacgcaga

     3661 cgcgccgaga cagaacttaa tgggcccgct aacagcgcga tttgctggtg acccaatgcg

     3721 accagatgct ccacgcccag tcgcgtaccg tcttcatggg agaaaataat actgttgatg

     3781 ggtgtctggt cagagacatc aagaaataac gccggaacat tagtgcaggc agcttccaca

     3841 gcaatggcat cctggtcatc cagcggatag ttaatgatca gcccactgac gcgttgcgcg

     3901 agaagattgt gcaccgccgc tttacaggct tcgacgccgc ttcgttctac catcgacacc

     3961 accacgctgg cacccagttg atcggcgcga gatttaatcg ccgcgacaat ttgcgacggc

     4021 gcgtgcaggg ccagactgga ggtggcaacg ccaatcagca acgactgttt gcccgccagt

     4081 tgttgtgcca cgcggttggg aatgtaattc agctccgcca tcgccgcttc cactttttcc

     4141 cgcgttttcg cagaaacgtg gctggcctgg ttcaccacgc gggaaacggt ctgataagag

     4201 acaccggcat actctgcgac atcgtataac gttactggtt tcacattcac caccctgaat

     4261 tgactctctt ccgggcgcta tcatgccata ccgcgaaagg ttttgcgcca ttcgatggtg

     4321 tccgggatct cgacgctctc ccttatgcga ctcctgcatt aggaagcagc ccagtagtag

     4381 gttgaggccg ttgagcaccg ccgccgc

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