1 基本說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。C58C1發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有pRiA4b農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（薔薇科，夾竹桃科，豆科，茄科，黃芩，煙草等），同時具有鏈霉素，利福平抗性。本公司生產(chǎn)的C58C1化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那霉素抗性）檢測，轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

2 基因型

Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR ) pRiA4b (agropine type)

3 儲存及使用環(huán)境

本產(chǎn)品應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融或放置時間過長，否則會降低轉(zhuǎn)化效率。

進(jìn)行轉(zhuǎn)化過程中，請根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。

4操作方法

1.取-80℃保存的C58C1發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

2.  每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高，第一次使用前最好做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量），用手快速、劇烈撥打管底混勻或用槍吹吸混勻，依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無抗生素的TY液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2小時。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3 天。

5注意事項

1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

2. 混勻質(zhì)粒時應(yīng)用手指快速撥打管底或用槍吹吸混勻，務(wù)必使質(zhì)粒快速、均勻分散開，與感受態(tài)細(xì)胞充分接觸。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。

4.  C58C1具有鏈霉素、利福平抗性，不可用于具有鏈霉素抗性或利福平抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。